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新冠核酸检测PCR实验室建设依据

发布日期:2022-09-26 浏览次数:687




RT-PCR是检测新型冠状病毒核酸最广泛、最准确的筛选和确认方法。大规模的核酸检测将不可避免地引起相关机构和单位重视建立标准化的临床PCR实验室。





01

新冠核酸检测PCR实验室建设依据



       新型冠状病毒实验室生物安全指南(第二版)、GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》、GB50346-2011《生物安全实验室建筑技术规范》、WS233-2017《病原微生物实验室生物安全通用准则》、《临床基因扩增实验室管理暂行办法》卫生部、《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》卫办医政发【2010】194号、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》。



02

初步了解PCR实验室


实验室内会为核酸检测准备4个区域,分别是试剂准备区、样本准备区、扩增区、扩增产物分析区。

其中试剂准备区负责接收患者样本,样本准备区则负责进行对样本的核酸进行提取,扩增区则是扩增复制核酸样本,扩增后分析区就是分析样本内核酸能能否与标准样配对,通过仪器检测的到,就判断成阳性,如果检测不到就是阴性。

PCR实验室分类:普通PCR实验室、全自动定量PCR实验室、一体自动化分析PCR实验室。


PCR实验室功能区域:


试剂准备区:是PCR实验室中最为“洁净”的区域,它不应有任何核酸成分的存在,否则将严重影响检测结果的准确性。标本的制备应在生物安全柜内进行。

主要设备:冰箱、低温冰箱、混匀器、微量加样器(0.2-1000ul)、移动紫外灯。

样本准备区:核酸提取、贮存,扩增反应管制作。

主要设备:冰箱、超低温冰箱、高速冷冻离心机、混匀器、微量加样器(0.2-1000ul)、移动紫外灯、水浴锅、生物安全柜。

扩增区:扩增反应体系的配置和核酸的提取加入要在扩增区内进行。

主要设备:扩增仪、离心机、微量加样器(0.2-1000ul)、移动紫外灯。

扩增产物分析区:产物分析区最后一个工作区域,用于扩增片段的分析。

主要设备:凝胶成像分析仪、电泳仪、电泳槽、微量加样器(0.2-1000ul)、移动紫外灯。

PCR实验室工作流向

进入各工作区域必须严格按照单一方向进行。即试剂准备区→样本准备区→扩增区→扩增产物分析区。






03

新冠核酸检测实验室设计参数(供参考)




一般情况下,PCR实验室没有严格的净化要求,因此有必要根据实验内容来确定实验室的洁净度。当PCR实验样品需要保护时,实验室应设洁净空调系统。对于新冠核酸检测实验室,建议设置10万级净化。






04

新冠核酸检测实验室建设的几个关键点



1.平面布局:不论是组合式还是分散式布置的PCR实验室,各功能房间均宜设置独立缓冲间。

1)试剂准备区是工艺流线的开始,设计为正压或常压,避免外界环境的污染。

2)样品制备区一般为常压或负压,大多数情况下设计成二级生物安全实验室,避免实验产物溢出,污染外界环境。

3)核酸扩增区为负压,避免实验产物溢出,污染外界环境。

4)产物分析区是最主要的扩增产物污染来源,通常压力设计为最低,避免实验产物溢出,污染外界环境。


2.区域空气流向:为避免交叉污染,PCR实验室空气流向必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。

3.通风空调:为避免交叉污染,各功能用房内空气不能掺混。混合式PCR实验室应采用新风直流空调系统,当采用新风系统有困难时,各区域的空气只能在自己的房间内循环。

4.生物安全:按照新型冠状病毒实验室生物安全指南(第二版)的规定,2019-nCoV病原体暂按照第二类病原微生物进行管理,则样本植被区宜为负压或加强型P2实验室,核酸操作应在生物安全柜内进行。

5.关键技术措施包括:

*绝对负压(避免室内潜在污染外泄)

*气流组织(室内定向流,从低污染风险区流向高污染风险区)

*排风无害化处理(高效过滤、高空排放)



05

新冠核酸检测实验室气流组织建议



(1)气流组织宜采用上送下排,送风口和排风口布置应使室内气流停滞的空间降低到最小程度。

(2)在生物安全柜操作面或其他有气溶胶操作地点的上方附件不得设送风口。

(3)高效过滤器排风口应设在室内被污染风险最高的区域,单向布置,不得有障碍。

(4)不能以回(排)风夹墙代替排风直管,排风高效过滤装置与排风总管的连接必须全部是实体风管。




06

新冠核酸检测实验室装饰装修



核酸检测实验室有设计理念、装修要求、净化空调系统、通风、自控、工艺设备等几个关键点。

材质:隔墙及吊顶——净化彩钢板、地面——同质透芯PVC地板、净化实验室专用门、观察窗;

要求:

1.墙面:光洁、不产尘积尘、耐腐蚀,易清洁消毒、无缝隙;

2.地面:防静电、耐腐蚀、无缝隙、无渗漏;

3.阴阳角:均用圆弧角密封处理;

4.门:必须设置自动互锁(机械或电子);

净化空调、通风系统、自控系统

1.避免交叉污染,采用全新风空调系统;

2.样品制备区严格按照BSL-2设计施工;

3.排风系统全部按照要求采用高效过滤器净化;

4.气流组织:采用上送下排形式;

5.压力梯度控制通过微压差计及精密自控系统控制;

6.实验室入口处显示房间内各项指标参数,并设置偏离报警;





07

工艺设备



1.实验台下部均留空,无死角;

2.全部采用不锈钢304制作;

3.样品制备区生物安全柜:BSC-||-B2型;

4.样品制备区设置洗眼装置,必要时应有应急喷淋装置;

5.非接触式操作理念(感应式水龙头、感应式自动门、互锁传递窗等);

实验室建设涉及到材料选择、稳定性、精度控制等多个技术和知识领域。不同的实验室由于试验样品和试验方法的不同,对实验室建设有不同的要求。可以说有很多不同之处。一个完善的实验室在分析检测中起着重要的作用,对保证实验室工作人员的健康也起着重要的作用。







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